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動態(tài)光散射--膠體金:藥物輸送的黃準?

  更新時間:2015-07-29 點擊量:3683

經(jīng)過十年的投入,納米技術(shù)已步入成熟如今納米醫(yī)用材料正逐步出現(xiàn)在臨床與醫(yī)學實踐中。從商業(yè)角度來說,2015年底,這一悉心培育的研究成果有望使生物醫(yī)學納米技術(shù)市場產(chǎn)值突破700億美元。而從實際應(yīng)用來看,這意味著疾病靶向及治療的方法可能會發(fā)生變革。


納米級的膠體金在多重治療與生物科技應(yīng)用中具有很大潛力。藥物輸送為例,通過控制膠體金*的化學、物理和電子特性,研究人員能夠開發(fā)出用于靶向藥物輸送的藥物-納米粒子復(fù)合物,提升藥物在病變組織、癌細胞等特定生物目標中的生物分配和藥代動力。因此,對創(chuàng)新細胞內(nèi)輸送媒介以及控制配方過程中的納米粒子粒度而言,納米粒子便成為了一個重要平臺,對于這項功能的定義至關(guān)重要。


本文闡述了檢測顆粒大小在生物醫(yī)學納米技術(shù)中的重要性,并通過展示實驗數(shù)據(jù)來說明如何利用的動態(tài)光散射(DLS)技術(shù)測量納米級和亞納米級的膠體金。


閃光之物:療法簡

自古時起,人們便認為具有治療特性。然而直到18世紀,含氰金鹽的抗菌性才被發(fā)現(xiàn)。時光飛逝,百余年后的今天,金鹽被用于風濕性關(guān)節(jié)炎的常規(guī)治療控制。但在這些傳統(tǒng)的治手段以外,現(xiàn)代對的膠體形態(tài)又燃起了新的興趣。


膠體金的許多特性使其非常適合于多種納米材料基質(zhì)的臨床應(yīng)用。它的化學和物理惰性確保在活體內(nèi)安全無毒,而精細的粒度則使它能夠在無損細胞的情況下穿過細胞膜。此外,懸浮在水介質(zhì)中的納米粒子會形成帶負電的離子,對蛋白質(zhì)、抗體等生物大分子有很強的親合性,使它們在離子的周圍形成生物配體。目前,顯像探針、診斷劑、藥物輸送等各種生物醫(yī)學應(yīng)用都在開發(fā)這些*的物理特性。在藥物輸送這一領(lǐng)域中,利用納米粒子為口服胰島素、基因療法所需靶向抗癌藥DNA復(fù)合物等一系列傳統(tǒng)創(chuàng)新療法提供輸送機制的研發(fā)活動也正在進行之中。


所有的微粒療法一樣,膠體金復(fù)合物的生物利用度和臨床療效等藥代動力學特性會在很大程度上受粒度影響。因此,控制膠體金的粒度是確保治療方法在活體內(nèi)符合療效與安全標準的關(guān)鍵。顆粒表征是納米粒子研發(fā)及質(zhì)量控制中非常重要的一方面,為此在配方的中間及終階段進行常規(guī)分析,以確保顆粒直徑均勻,分散中不存在聚集體。這需要一項強有力的分析技術(shù),將整個樣本內(nèi)穩(wěn)健可靠的顆粒表征與常規(guī)分析所要求的率相結(jié)合。作為一項滿足此類行業(yè)需求的效技術(shù)動態(tài)光散射(DLS)的優(yōu)勢正在凸顯。


引入動態(tài)光散射

在納米粒子的開發(fā)中,有幾種常規(guī)使用的顆粒表征技術(shù)。采用電子顯微鏡顆粒顯像技術(shù)已廣泛用于細致了解系統(tǒng)內(nèi)各個顆粒的結(jié)構(gòu)與形態(tài)(圖1)。然而,該技術(shù)存在的若干局限性限制了其在常規(guī)分析中的實際應(yīng)用。


電子顯微鏡僅僅能夠測量少數(shù)樣本分布,且測得的是基于數(shù)量的粒度平均值。而膠體金產(chǎn)品由成千上萬的顆粒組成,因此從統(tǒng)計角度來說,根據(jù)此類數(shù)據(jù)來推斷產(chǎn)品的整體均勻性或聚集體濃度可能并不是好方法。即使出現(xiàn)低量的聚集體,臨床療效也會受影響,而且這通常還表示加工或配方存在問題,因此質(zhì)量控制不能僅依靠電子顯微鏡。此外,電子顯微鏡分析通常耗時長、強度大,既費成本又費力。因此需要一項集合技術(shù)來做補充,以體積或質(zhì)量為基準,確定整個分散中的粒度分布,從而識別出不合規(guī)格的聚集體。


動態(tài)光散射(DLS)是一項非入侵式技術(shù),通常用于分析分散粒子及膠態(tài)納米粒子。DLS技術(shù)檢測做無規(guī)則布朗運動的懸浮顆粒得到散射光強度隨時間產(chǎn)生的波動。分析這些光強波動后便可以得到擴散系數(shù),然后斯托克斯-愛因斯坦方程算顆粒大小


近年來,DLS技術(shù)的一些已經(jīng)提升了DLS測量在納米級范圍中的靈敏度和分辨率。例如,獲得的非侵入式背散射(NIBS)光學儀器現(xiàn)已動態(tài)粒度范圍內(nèi)進行測量,可測顆粒直徑在0.3nm10微米之間,溶液濃度涵蓋0.1ppm40%w/v。用DLS技術(shù)進行數(shù)據(jù)采集速度快,不影響樣本回收,無論在研究領(lǐng)域,還是質(zhì)量控制中,都能夠有效發(fā)揮作用。


以下案例分析探討了DLS技術(shù)用于納米粒子表征的優(yōu)勢。膠體金的實驗數(shù)據(jù)重點說明了通過DLS技術(shù)獲得的結(jié)果與電子顯微鏡技術(shù)之間的差別,以及如何借此更好地了解納米粒子體系。


案例研究:使用DLS技術(shù)進行膠體金表征

實驗利用DLS系統(tǒng)(英國馬爾文儀器Zetasizer Nano S)對某一膠體金樣本進行了測量。所有測量都在25℃進行, DLS系統(tǒng)使用633nm激光光源,雪崩光電二極管(APD)作為光電探測器,檢測散射光角度為173。


圖2展示了膠體金樣本的光強粒度分布。圖中顯示了粒子的光散射在不同粒度等級中所占的相對百分比。分別位于13.6nm339nm處的兩個不同峰表示粒子呈雙峰分布,說明樣本內(nèi)存在聚集體。


首先,從粒度分布峰值的相對光強來看,樣本內(nèi)似乎存在的聚集體。然而,將其轉(zhuǎn)換成基于體積的分布時,如圖2所示,顯然實際上聚集體的濃度是相對較低的。這一轉(zhuǎn)換由智能儀器軟件實施,其中用了米氏散射理論以及粒子的折光指數(shù)和吸收。體積粒度分布顯示,單位質(zhì)量內(nèi)絕大多數(shù)樣本顆粒為13nm左右的小顆粒,且原始粒子與聚集體之比為9:1


將基于體積或光強的粒度測量與基于數(shù)量的分析方法相比較,便會發(fā)現(xiàn)DLS技術(shù)與傳統(tǒng)納米粒子分析技術(shù)相互補充的價值所在。圖4所示,基于體積的分布轉(zhuǎn)換成了基于數(shù)量的分布。由于樣本所含的聚集體極少,因此數(shù)量分布為單峰,峰均值為12.4,且僅考慮了原始粒子。該結(jié)果表明,如果用電子顯微鏡等技術(shù)對該樣本進行表征,所呈現(xiàn)的大部分顆粒將會是小顆粒,因而難以地推斷出聚集體的整體濃度。


動態(tài)光散射分辨率相對低于電鏡技術(shù)通常來講如果顆粒粒徑相差三倍或者更多,可以通過動態(tài)光散射技術(shù)得到分開的分布峰。然而,通過智能數(shù)據(jù)解讀,我們還是可以了解到相當多的樣品的粒徑分布信息。比如,單個顆粒與由2、34個顆粒組成的聚集體相混合時可能會產(chǎn)生一個寬峰。由于較大的顆粒散射了大部分光,因此相較于顆粒較小的原始粒子,聚集體對于峰的影響更大。Z-均直徑和多分散指數(shù)值對聚集體的存在表現(xiàn)敏感,因此可以很好地指示樣本內(nèi)是否存在聚集體。Z-均直徑是光強加權(quán)流體力學直徑的平均值,多分散指數(shù)PDI表征了顆粒粒徑分布寬度。這兩項參數(shù)均由系統(tǒng)根據(jù)動態(tài)光散射標準ISO22412計算得出。


關(guān)于動態(tài)光散射

納米粒子的開發(fā)和配方需要對整個樣本進行快速可靠的質(zhì)量控制分析,而動態(tài)光散射提供了滿足這一需求的解決方案。通過具有*統(tǒng)計學意義的粒度分布,DLS技術(shù)使用戶能夠快速地識別出聚集體或不合規(guī)格顆粒,而如果僅利用基于數(shù)量的粒度測量技術(shù)則可能無法做到。如今,商用DLS系統(tǒng)已經(jīng)可以使用這一技術(shù),為生物醫(yī)藥應(yīng)用中的納米粒子均勻性與聚集研究提供所需高靈敏度、高度和高分辨率分析。


Stephen Ball 為馬爾文儀器納米粒子與分子表征產(chǎn)品營銷。他于英國薩里大學獲得計算機輔助化學學位,期間作為研究化學師在瑞士豪爾根的陶氏化學公司進行了為期一年的產(chǎn)業(yè)實習。在加入馬爾文儀器之前,他曾在Polymer Laboratories擔任應(yīng)用化學師,隨后又在安捷倫科技擔任光散射儀器產(chǎn)品一職。

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